Separation and determination of gallic acid and ellagic acid by high performance liquid chromatographicmethod

Abstract

            ไดเตรียมเฟสคงที่พอลิเมอรลอกแบบโมเลกุลสําหรับแยกกรดแกลลิก (จีเอ) และกรดเอลลาจิก (อีจีเอ) เตรียมพอลิเมอรดวยวิธีใหความรอนที่ประกอบดวยเบนโซอิลเปอรออกไซดเปนตัวเริ่มปฏิกิริยา ตัวทําละลายผสมระหวางโดเดคคานอล และทูลูอีน ไดไวนิลเบนซีนเปนตัวเชื่อมโยงโมเลกุลและสไตรนเป็นมอนอเมอร์ตามลำดับ ทําการแยกกรดแกลลิกและกรดเอลลาจิกดวยเทคนิคโครมาโทกราฟของเหลวสมรรถนะสูง โดยใชคอลัมน GA-EGA-MIP ขนาด 50×4.6 มิลลิเมตรแยกดวยเฟสเคลื่อนที่ระหวางน้ำ และอะซิโตไนไตรลที่พีเอช 3 (อัตราสวน 5:95 โดยปริมาตร) อัตราการไหล 0.1 มิลลิลิตรตอนาที และตรวจวัดที่ความยาวคลื่น 280 นาโนเมตร เก็บสารละลายตัวอยางจากที่แยกไดจากคอลัมน GA-EGA-MIP และนํามาวิเคราะหหาปริมาณกรดแกลลิก และกรดเอลลาจิกในตัวอยาง ที่ถูกแยกดวยคอลัมน Ultra C18 ขนาด 150×4.6 มิลลิเมตรแยกสารโดยมีการปรับอัตราสวนของอะซิโตไนไตรลและน้ำในชวงเวลาการแยกดวยอัตราการไหล 1.0 มิลลิลิตรตอนาที ปริมาตรฉีดสาร 10 ไมโครลิตร และตรวจวัดที่ความยาวคลื่น 280 นาโนเมตร พบขีดจํากัดของการวิเคราะหไดของกรดแกลลิกและกรดเอลลาจิก เทากับ 1.02 และ 2.29 ไมโครกรัมตอมิลลิลิตร ตามลําดับ วิธีนี้มีความเหมาะสมสําหรับแยกและทําใหบริสุทธิ์ของกรดแกลลิกและกรดเอลลาจิกจากสารสกัดลําไย            Molecularly imprinted polymers stationary phase was prepared for the separation of gallic acid (GA) and ellagic acid (EGA) by thermal polymerization method using benzoylperoxide as initiator, the mixtures of dodecanol and toluene as porogens, divinylbenzene as cross-linker and styrene as a functional monomer, respectively. Gallic acid and ellagic acid solutions were separated by HPLC using GA-EGA-MIP column, 50×4.6 mm as MIP column with the mobile phase; water-acetonitrile (5:95, v/v) adjusted to pH 3.0. The flow rate was adjusted to 0.1 mL min-1. The absorption was made at 280 nm. The sample solution was collected from GA-EGA-MIP column and then was injected into the analytical column used was Ultra C18 column, 150×4.6 mm for determination of gallic acid and ellagic acid in sample solution. The mobile phase was eluted with gradient system containing a mixture of acetonitrile and water. The flow rate was used to 1.0 mL min-1. The injection volume was adjusted to 10 μL and the absorption was made at 280 nm. The results of quantitation limit of GA and EGA were found to be 1.02 and 2.29 μg mL-1, respectively. This approach method is shown to be successfully for the separation and purification of gallic acid and ellagic acid from Dimocarpus longan extract